分光光度法是根據物質的吸收光語及光的收收定律，對物質進行定性、定量分析的一種方法，當光照射浴液時，當光子的能量（hv)與被照射物質的基態和激發態能量之差（DE)相等時，就能被吸收，不同物質的基態和激發態的能量之差不等，因此，吸收光子的能量也不同，即吸收光的波長不同，這就是物質對光的選擇性吸收。物質選擇性的吸收某種顏色的光，則呈現的是照收光的互補色。以入射光的波長（l）為橫坐標，溶液的吸光度（A）為縱坐標畫出的曲線，即吸收光譜，吸收光語中吸光度的波長，為吸收波長，用/ms表示。
分光光度法測定物質含量的依據是Lambert-Beer定律（朗伯-比爾定律），即A=Kbc
式中，A為溶液的吸光度：c為溶液的濃度；b為液層厚度。
定量測定時，常用的定量方法有標準曲線法、標準對照法、比吸光系數比較法以及差示分光光度法。它們各有其適用的范圍。由于許多物質在可見光區無特征吸收，而在近紫外(200~400nm)處有特征吸收，故需用紫外光為光源進行測定。
